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甲基-β-環(huán)糊精在提高桿狀病毒對哺乳動(dòng)物細胞轉導效率中的應用

       桿狀病毒是一類(lèi)具有囊膜的雙鏈DNA病毒,在自然界中的天然宿主是鱗翅目、膜翅目和雙翅目昆蟲(chóng)。目前應用的昆蟲(chóng)桿狀病毒表達系統主要有AcMNPV和家蠶核型多角體病毒,由于桿狀病毒具有較強的polyhedrin和P10啟動(dòng)子,表達的外源蛋白能夠進(jìn)行較好的修飾加工,具有良好的生物學(xué)活性,且其基因組可以插入較大片段外源DNA,所以昆蟲(chóng)桿狀病毒表達系統已被公認為是優(yōu)良的真核表達系統。

       桿狀病毒宿主域極窄,比如BmNPV僅僅能高效的感染家蠶或者家蠶細胞,但部分桿狀病毒可以轉導哺乳動(dòng)物細胞,但是不能在哺乳動(dòng)物中復制,因此對人畜無(wú)害。由于部分桿狀病毒可以轉導哺乳動(dòng)物細胞,因此可以作為優(yōu)良的哺乳動(dòng)物細胞基因轉移載體,已在基因治療、疫苗開(kāi)發(fā)、藥物篩選以及基因調控研究等方面發(fā)揮巨大作用。近年來(lái),國內外許多學(xué)者致力于利用低溫(4℃)讓桿狀病毒停留在細胞膜上,然后利用外在的低pH誘導促使病毒在細胞膜表面和細胞融合,也可顯著(zhù)提高對哺乳動(dòng)物細胞的轉導效率。也有通過(guò)在病毒表面展示外源蛋白來(lái)提高轉導效率的報道,但是這需要對病毒進(jìn)行額外的基因操作。如果能應用操作簡(jiǎn)便的方法提高轉導效率、進(jìn)而提高外源基因表達量,可節省大量人力物力,達到事半功倍的效果。

       甲基倍他環(huán)糊精是倍他環(huán)糊精(β-CD)的烷基化衍生物,在食品及藥物中得到了廣泛應用。本課題組研究發(fā)現,在利用BmNPV對哺乳動(dòng)物細胞進(jìn)行轉導前,先用一定濃度的MβCD孵育正常培養的細胞,孵育后,去除孵育液,再用BmNPV感染細胞,即可顯著(zhù)提高BmNPV對哺乳動(dòng)物細胞轉導效率,最終增加了BmNPV對外源蛋白的表達量。利用MβCD提高BmNPV對哺乳動(dòng)物細胞的轉導效率還未見(jiàn)研究報道,因此本發(fā)明是首次對這種提高桿狀病毒對哺乳動(dòng)物細胞轉導效率的方法做具體闡釋。

       甲基-β-環(huán)糊精在提高桿狀病毒對哺乳動(dòng)物細胞轉導效率中的應用,其步驟是用一定濃度的甲基倍他環(huán)糊精孵育正常培養的哺乳動(dòng)物細胞,孵育30min后,去除孵育液,再用BmNPV轉導哺乳動(dòng)物細胞,即可顯著(zhù)提高BmNPV對哺乳動(dòng)物細胞轉導效率。部分桿狀病毒可以攜帶外源基因進(jìn)入哺乳動(dòng)物細胞,用于基因轉導和基因治療載體。然而,桿狀病毒對哺乳動(dòng)物細胞的轉導效率普遍較低,極大限制了其作為基因治療載體的應用。本發(fā)明提供的方法可以有效提高桿狀病毒對哺乳動(dòng)物細胞的轉導效率,該方法操作簡(jiǎn)單,易于理解。


甲基-β-環(huán)糊精在提高桿狀病毒對哺乳動(dòng)物細胞轉導效率中的應用(圖1)

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